铬还原酶T体外合成及活性鉴定

目的：克隆沙雷氏菌CQMUS2中铬还原酶T（ChromatereductaseT，ChrT）的全基因，构建其原核表达载体并转化至大肠杆菌中表达蛋白，分析表达产物的活性。方法：应用PCR技术，以耐铬沙雷氏菌CQMUS2基因组DNA为模板扩增ChrT全基因，将该基因连接至表达载体pET-28a（+）并转化进大肠杆菌感受态细胞E.coliBL21（DE3）表达，用酶促反应鉴定重组ChrT酶的活性和Cr（Ⅵ）还原能力，探索其最适pH和温度。结果：克隆出的ChrT全基因长为567bp，编码188个氨基酸，分子量约20kD；IPTG诱导10h后，在大肠杆菌中成功表达了目的蛋白，其碱基序列和分子量与ChrT酶一致；纯化后，ChrT酶能还原酶促反应体系中的Cr（Ⅵ），使实验组Cr（Ⅵ）含量明显低于对照组（P＝0.000），其酶活可达997U/L；ChrT酶的最适pH为6.5~7.5，最适温度为37℃。结论：ChrT酶具有Cr（Ⅵ）还原活性，为进一步研究高效除铬基因工程菌奠定了基础。