乙型肝炎病毒全基因组1.3倍体重组腺病毒的构建与表达

目的：构建乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus，HBV）重组腺病毒，为HBV的相关研究提供一种高效率、便捷的实验手段。方法：将HBV1.3倍体的片段构建到pAdTrack-TO4穿梭载体上，再经限制性核酸内切酶PmeⅠ线性化后转入含有腺病毒骨架载体pAd-Easy1的BJ5183感受态中进行重组并鉴定。鉴定正确后的重组腺病毒质粒经PacⅠ线性化后转染入HEK-293细胞进行病毒包装，获取HBV1.3倍体的重组腺病毒（Ad-HBV1.3）。通过荧光显微镜进行感染效率的检测；用ELISA、Westernblot方法在蛋白水平检测HBV蛋白表达情况；小鼠尾静脉注射HBV1.3倍体的重组腺病毒，检测经腺病毒感染后的小鼠体内HBV表达情况。结果：在Ad-HBV1.3腺病毒感染后，细胞的感染效率可达到95%以上；ELISA实验检测实验组乙型肝炎s蛋白（hepatitisBvirusSprotein，HBs）、乙型肝炎e蛋白（hepatitisBvirusEprotein，HBe）表达量明显高于对照组；Westernblot结果显示感染Ad-HBV1.3腺病毒后可有高水平的HBs表达；动物实验显示小鼠在注射Ad-HBV1.3腺病毒后体内HBs在第3天即可开始表达，5d达到峰值，7d后逐渐下降。结论：本研究成功构建了可表达HBV的重组腺病毒，其感染效率可高达95%，为HBV相关研究提供一种简单高效的研究手段。