应用肽核酸反向杂交技术检测HBV阿德福韦耐药突变株

目的：建立一种肽核酸（peptidenucleicacid，PNA）反向杂交技术，用于检测乙肝病毒阿德福韦酯（adefovirdipivoxil，ADV）常见耐药突变位点。方法：利用反向杂交技术，设计出特异性的PNA探针，与PCR扩增后带有生物素标记的样本进行杂交；通过对探针浓度，杂交温度和时间等条件的优化建立起最佳反应条件。应用该技术检测了临床ADV治疗慢性乙肝患者的72例血清样本，与测序法比较了其检测的准确性。结果：（1）通过共价结合能够将PNA探针固定在尼龙膜上，特异性检测ADV常见耐药突变位点。（2）与直接测序法相比，PNA反向杂交技术检测准确性为97.88％。结论：通过优化杂交反应，建立起快速、灵敏的检测乙肝病毒ADV常见耐药突变位点的PNA反向杂交技术。