Calpain2及其抑制剂在肝纤维化细胞凋亡中的机制

目的：探讨钙中性蛋白酶2（calpain2）及其抑制剂calpastatin在肝纤维化过程中的表达变化及他们在肝细胞凋亡中的作用。方法：雄性Wistar大鼠40只，随机分为正常组4、8周组和肝纤维化4、8周组，每组各10只。肝纤维化组按0.3ml/100g体质量皮下注射40%CCl4植物油溶液，每隔3d注射１次，造模时间分别为4周和8周；正常组大鼠皮下注射等量植物油溶液。采用原位末端转移酶标记（terminaldeoxynucleotidyltransferase-mediateddUTP-biotinnickendlabeling，TUNEL）法检测肝组织中肝细胞凋亡的情况；免疫组织化学法及Westernblot检测肝组织中calpain2、calpastatin及活性caspase3的表达情况；real-timePCR检测肝组织中calpain2及calpastatinmRNA的表达变化。结果：免疫组化及Westernblot检测显示肝纤维化4周组大鼠肝组织中calpain2及calpastatin蛋白的表达与正常4周组比较差异无统计学意义（P>0.05）；随着肝纤维化程度的加重，肝纤维化8周时大鼠肝组织中calpain2的表达明显增加，而calpastatin的表达明显减少；real-timePCR检测发现肝纤维化4、8周组大鼠肝组织中calpain2mRNA表达较相应的正常对照组明显增加（P＜0.01），而calpastatinmRNA的表达在肝纤维化8周组明显减少（P＜0.01）；此外，通过免疫组化及Westernblot发现肝组织中活性caspase3的表达在肝纤维化4周时已明显增加，肝纤维化8周时达高峰；同时TUNEL法检测发现肝纤维化大鼠肝组织中肝细胞凋亡的数目较正常组大鼠显著增加（P＜0.01）。结论：calpain2与calpastatin在蛋白及基因水平的表达变化，提示他们可能参与了肝纤维化的发生发展过程，其致肝纤维化的机制可能与促进肝细胞的凋亡有关。