shRNA沉默YAP基因对人肾癌786-O细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨慢病毒干扰载体沉默Yes-相关蛋白（Yes-associatedprotein，YAP）对人肾癌786-O细胞增殖和凋亡的影响。方法：用细胞免疫荧光法检测肾癌786-O细胞中YAP蛋白表达情况；构建针对YAP基因的shRNA慢病毒干扰载体转染786-O细胞。RT-PCR和Westernblot分别检测干扰786-O细胞前后YAPmRNA及蛋白的表达情况；CCK-8（cellcountingkit-8）法检测沉默YAP后细胞增殖的改变；流式细胞仪（flowcytometry，FCM）检测细胞凋亡和周期的变化。结果：786-O细胞中YAP蛋白表达于细胞浆和细胞核；shRNA-YAP慢病毒干扰载体转染4d后，可明显下调786-O细胞YAPmRNA及蛋白表达水平（P=0.000），并且明显抑制细胞增殖和促进细胞凋亡（P=0.000）；细胞周期紊乱，G1期细胞明显增加，S期细胞明显降低（P=0.000）。结论：YAP-shRNA慢病毒干扰载体能有效抑制YAP基因在786-O细胞中表达，进而抑制细胞增殖并促进细胞凋亡。