双氢青蒿素对前列腺癌PC-3细胞UCHL1基因转录调节的影响及机制

目的：探讨双氢青蒿素（dihydroartemisinin，DHA）对前列腺癌PC-3细胞泛素羧基末端水解酶1（ubiquitincarboxyl-ter－minalhydrolaseL1，UCHL1）基因转录调节的影响及机制。方法：将PC-3细胞分为空白组、DHA组及5-杂氮-2’脱氧胞苷（5-Aza-2’-deoxycytidine，５-Aza-CdR）组（2.5μmol/L5-Aza-CdR）。空白组为不加药物；DHA组根据浓度的不同再分为DHA1、DHA2、DHA3、DHA4组，DHA终浓度分别为12.5、25、50、100μmol/L。培养48h后，收集细胞。应用real-timePCR检测UCHL1及DNA甲基化转移酶（DNAmethyltransferase，DNMTs）的mRNA表达；亚硫酸氢盐基因组测序法（bisulfitegenomicsequencing，BGS）检测UCHL1CpG岛的甲基化状态；Westernblot法检测UCHL1蛋白的表达。结果：DHA和５-Aza-CdR分别处理细胞后，UCHL1的启动子甲基化水平明显降低（χ2=150.1，P=0.000；χ2=127.7，P=0.000）；UCHL1mRNA表达水平明显上调（P均<0.05）；UCHL1蛋白表达水平上升（P均<0.05），双氢青蒿素处理后甲基化转移酶的mRNA表达减少（P均<0.05）。结论：DHA可逆转PC-3细胞UCHL1基因的甲基化状态，其可能通过下调DNMTs的表达而影响DNA的甲基化过程。