整合素α9在人脂肪源性间充质干细胞向淋巴管内皮细胞分化过程中的表达变化

目的：从人体脂肪组织中分离培养出脂肪源性间充质干细胞（adipose-derivedstemcells，ADSCs），诱导其向淋巴管内皮细胞（lymphaticendothelialcells，LECs）分化，同时探讨分化过程中整合素α9（integrinα9）表达的变化，旨在寻找淋巴水肿分子治疗靶点，为ADSCs应用于淋巴水肿的分子治疗奠定实验基础。方法：①从吸脂术后废弃的人体脂肪组织中分离培养出ADSCs，倒置相差显微镜观察原代及传代细胞的形态特征。②流式细胞仪（flowcytometry，FCM）检测第3代ADSCs表面特征性抗原CD90、CD29、CD34及CD４５的表达；MTT法绘制生长曲线。③用人血管内皮细胞生长因子（vascularendothelialgrowthfactor，VEGF）C、人VEGF-A、血小板源性生长因子BB（platelet-derivedgrowthfactor-BB，PDGF-BB）诱导其向LECs方向分化，同时以人LECs作为阳性对照组。④Westernblot检测各组细胞LECs表面特征性抗原淋巴管内皮细胞透明质酸受体-1（lym－phaticendothelialhyaluronanreceptor-1，LYVE-1）、血管内皮细胞特征性抗原CD34及integrinα9的表达。⑤FCM检测各组细胞周期，使用SPSS17.0对实验数据进行统计分析。结果：①ADSCs贴壁生长，呈长梭形，第1、3、5代ADSCs的生长曲线均呈S形；细胞表面抗原为CD90+、CD29+、CD34-、CD45-。②实验组及阳性对照组LYVE-1表达阳性、CD34表达均阴性，integrinα9的表达趋势与LYVE-1一致，且二者在实验组的表达水平低于阳性对照组；三者在阴性对照组中的表达均为阴性。③各组G0/G1期细胞比例有明显统计学差异（P<0.01），实验组与阳性对照组G0/G1期细胞比例显著小于阴性对照组（P<0.01），实验组与阳性对照组之间无明显统计学差异（P=0.083）。结论：ADSCs离体培养，具有向LECs分化的潜能。使用VEGF-C、VEGF-A、PDGF-BB可诱导部分人ADSCs向LECs分化。在人ADSCs向LECs分化过程中integrinα9的表达增强，分化前后细胞的周期发生了改变。该分子在LECs的形成过程中可能发挥着极为重要的作用，将有望在淋巴水肿的再生治疗中成为重要的分子靶点之一。