TCF7L2基因RNA干扰对胰岛素原水平的影响及机制

目的：研究转录因子7类似物2（transcriptionfactor7like2，TCF7L2）表达下调对胰岛素原水平的影响，进一步探讨TCF7L2通过前蛋白转化酶（proproteinconvertase，PC）基因影响胰岛素原水平的机制。方法：在体外培养Beta-TC-6细胞株，通过构建TCF7L2的RNA干扰慢病毒转染细胞，下调TCF7L2的表达，实验分为3组，分别为空白对照组、乱序对照组和TCF7L2干扰组，采用qRT-PCR和Westernblot检测TCF7L2和PC基因mRNA及蛋白水平的变化；收集上清液，采用ELISA方法测定基础和葡萄糖刺激状态下胰岛素和胰岛素原水平的变化。结果：慢病毒感染Beta-TC-6细胞48h后，在荧光显微镜下观察慢病毒感染效率达95%以上，与空白对照组比较，TCF7L2mRNA的干扰率约为75%（0.25±0.03vs.0.97±0.11，P=0.000），蛋白质水平的干扰率约为50%（0.29±0.08vs.0.57±0.09，P=0.008）。与乱序对照组比较，TCF7L2干扰组葡萄糖刺激后胰岛素水平明显降低（7.47±0.21）mU/Lvs.（10.53±0.38）mU/L（P=0.000），而胰岛素原水平却明显增加（10.73±0.51）pmol/Lvs.（7.81±0.29）pmol/L（P=0.001），且PC1和PC2的mRNA和蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）。结论：TCF7L2基因的RNA干扰可能通过降低PC基因的表达，进而减少该酶对胰岛素原的加工，从而影响胰岛素原的水平。