骨髓间充质干细胞在C6脑胶质瘤细胞微环境中瘤性转化的生物学分析

目的：探讨骨髓间充质干细胞（bonemarrow-derivedmesenchymalstemcells，BMSCs）在C6脑胶质瘤细胞微环境中是否发生了生物学特性的改变。方法：全骨髓贴壁筛选法分离培养SD大鼠BMSCs，免疫荧光（immunofluorescence，IF）法检测BMSCs表面标志分子CD90+、CD105+、CD45-；活细胞荧光染料CM-Dil标记BMSCs（CM-Dil+BMSCs），流式细胞术（flowcytome－try，FCM）检测标记效率，台盼蓝染色法连续监测BMSCs死亡率；CM-Dil+BMSCs与C6脑胶质瘤细胞直接接触共培养为直接共培养组，BMSCs与C6脑胶质瘤细胞非接触共培养为间接共培养组，阳性对照组为C6脑胶质瘤细胞单独培养，阴性对照组为BMSCs单独培养，培养7d后，IF法检测各组酸性胶质纤维蛋白（glialfibrillaryacidicprotein，GFAP）、CD90、CD105表达情况；FCM分选实验组CM-dil+BMSCs和C6脑胶质瘤细胞，实时荧光定量聚合酶链反应（realtimequantitativepolymerasechainre－action，RT-qPCR）检测各组GFAP、PTEN、Bcl-xl、CyclinD1、CD90、CD105基因的表达。结果：①培养至第3代的BMSCs90%以上表达CD90、CD105且不表达CD45；②IF结果显示直接共培养组、间接共培养组BMSCs细胞表达GFAP水平较阴性对照组BMSCs均增高。③RT-qPCR结果显示直接共培养组、间接共培养组BMSCs细胞GFAP、PTEN、Bcl-xl、CyclinD1基因表达水平较阴性对照组BMSCs明显增高（P＜0.05），且直接共培养组与间接共培养组比较无明显差异（P＞0.05）；同时，直接共培养组、间接共培养组BMSCs的CD90、CD105基因表达水平较阴性对照组BMSCs显著降低（P＜0.05）。结论：BMSCs在C6脑胶质瘤细胞微环境中存在潜在瘤性转化的倾向。