SPIO-PLL-pshRNA分子探针转染卵巢癌SKOV3细胞及MR成像研究

目的：利用多聚赖氨酸修饰的超顺磁性氧化铁（superparamagneticironoxidemodifiedwithPoly-L-lysine，SPIO-PLL）及质粒pGenesil1-shRNA构建SPIO-PLL-pshRNA分子探针，并初步评价其体外转染卵巢癌细胞SKOV3及MR成像的可行性。方法：利用静电吸附法连接SPIO-PLL和质粒pGenesil1-shRNA，微量分光光度计检测复合物离心后上清液中质粒DNA浓度，评测SPIO-PLL与质粒的结合能力；凝胶阻滞实验及zeta电位测定验证两者结合；通过普鲁士蓝染色法观察铁的入胞情况及荧光显微镜观察绿色荧光蛋白在细胞中的表达来检测复合物的细胞转染能力；MR扫描观察细胞转染后信号改变。结果：DNA结合实验、凝胶阻滞实验结果显示当SPIO-PLL和质粒质量比达6∶1时，二者可有效结合；激光粒度仪测定SPIO、SPIO-PLL、SPIO-PLL-pshRNA3组样品的zeta电位分别为（-14.8±0.35）、（15.2±0.55）、（3.6±0.35）mV，3组结果差异有统计学意义（F=6323.782，P=0.000；LSD-t：均P=0.000）；所制备的SPIO-PLL-pshRNA分子探针体外转染细胞后，用普鲁士蓝染色法可检测到细胞内有铁颗粒分布，荧光显微镜观察到绿色荧光蛋白表达，MR扫描结果示无探针转染组及10、20、40μg/ml3种浓度探针转染组的T2*信号强度值分别为（558±19）、（427±16）、（283±19）、（191±8），琼脂糖组及蒸馏水组分别为（600±36）、（670±16），随着探针浓度升高，信号强度降低，各组结果差异有统计学意义（F=279.667，P=0.000；SNK-q：均P<0.05）。结论：SPIO-PLL纳米粒可有效结合质粒pGenesil1-shRNA，制得SPIO-PLL-pshRNA分子探针，该探针于体外成功转染卵巢癌SKOV3细胞，并于MR扫描下T2*WI信号强度降低。