RNA干扰STAT3基因对结肠癌细胞sw620凋亡的影响

目的：构建针对信号转导和转录活化因子3（signaltransducersandactivatorsoftranscription3，STAT3）的小RNA干扰表达质粒，利用该质粒特异性抑制人结肠癌sw620细胞中STAT3基因的表达，观察RNA干扰STAT3基因对人结肠癌细胞sw620凋亡的影响。方法：将针对STAT3基因的干扰短发卡RNA（shorthairpinRNA，shRNA）克隆到pGenesil-1质粒表达载体中，命名为p-shSTAT3。质粒转染sw620细胞48h后，利用RT-PCR（reversetranscriptionPCR）和Westernblot技术检测STAT3基因mRNA和蛋白水平上的表达情况。利用Hochest33258染色对转染后sw620细胞的凋亡情况进行检测；利用Westernblot技术对STAT3基因调控相关的凋亡信号通路中的p53、Caspase3、Bax、Bcl-XL和Bcl-2蛋白的表达情况进行检测。结果：转染STAT3干扰质粒能在细胞水平上有效抑制sw620细胞中STAT3基因mRNA和蛋白水平上的表达（P=0.000）。Hochest33258染色表明在sw620细胞中干扰掉STAT3基因的表达能促进细胞凋亡的发生（P=0.000），乱序对照对细胞无明显的凋亡促进作用（P=0.218）。对作用机理进行研究后发现，在sw620细胞中干扰掉STAT3基因能促进p53、Caspase3和Bax3个凋亡诱导蛋白的表达；同时下调Bcl-XL和Bcl-22个凋亡抑制蛋白的表达。结论：利用RNA干扰技术干扰掉sw620细胞中STAT3基因的表达能促进sw620细胞凋亡，为结肠癌治疗提供新的研究思路和作用靶点。