DLC-1基因重组慢病毒表达载体的构建及其在结直肠癌SW480细胞中的表达

目的：构建携带肝癌缺失基因-1（deletedinlivercancer-1，DLC-1）的重组慢病毒表达载体并实现DLC-1基因在结直肠癌（colorectalcancer，CRC）SW480细胞中的过表达。方法：将DLC-1基因的靶序列与载体质粒pcDNA3.1（+）-GFP连接成重组质粒。重组质粒经双酶切法及基因测序验证构建正确后包装成慢病毒颗粒并计算病毒滴度。重组慢病毒感染SW480细胞，同时设置阴性对照组和空白对照组流式细胞仪（flowcytometry，FCM）检测感染率；real-timePCR及Westernblot检测SW480细胞中DLC-1基因表达水平。结果：重组质粒构建正确。重组慢病毒滴度为1×109TU/ml；对SW480细胞的感染率为90%；DLC-1mRNA在重组慢病毒组细胞中过表达；重组慢病毒组DLC-1蛋白的表达水平显著高于阴性对照组（P=0.000）；阴性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义（P=0.902）。结论：成功构建了高滴度的DLC-1基因重组慢病毒，其携带的DLC-1基因能够在CRCSW480细胞中过表达，为后续研究DLC-1基因的表达在CRC的发生、发展中的作用奠定了实验基础。