姜黄素诱导人髓母细胞瘤Daoy细胞自噬的实验研究

目的：观察姜黄素（Curcumin）诱导人髓母细胞瘤Daoy细胞自噬的作用，并探讨其可能的作用机制。方法：体外培养人髓母细胞瘤Daoy细胞，不同浓度姜黄素作用24、48、72h，MTT法检测细胞增殖；荧光染色、RT-PCR和Westernblot检测自噬相关蛋白Beclin1和LC3的表达；RT-PCR和Westernblot检测PI3K/Akt/mTOR信号通路中PI3K、p-Akt和p-mTOR的表达。PI3K激动剂insulin处理细胞后，Westernblot检测PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达变化。结果：姜黄素明显抑制Daoy细胞的生长，呈时间-剂量依赖性。免疫荧光显示Beclin1和LC3在姜黄素处理组中的表达明显增强。姜黄素作用不同时间，Daoy细胞中Beclin1和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的mRNA和蛋白水平均增高（mRNA：F=1360.962、42.366，P=0.000、0.000；蛋白：F=32.723、11.847，P=0.001、0.008），而PI3K、p-Akt和p-mTOR的表达受到明显抑制（F=329.662、80.638、183.536，P=0.000、0.000、0.000）。PI3K激动剂insulin不能有效阻断姜黄素引起的PI3K、p-Akt和p-mTOR的降低。结论：姜黄素诱导自噬抑制髓母细胞瘤Daoy细胞生长，其机制可能与上调自噬相关基因表达，抑制自噬负调控PI3k/Akt/mTOR信号通路有关。