海马神经元无镁致痫性损伤对CREB磷酸化水平的影响

目的：观察原代培养的海马神经元经无镁人工脑脊液诱发癫痫样放电后，cAMP反应元件结合蛋白（cAMPresponse-elementbindingprotein，CREB）磷酸化表达水平的变化。方法：将所培养的神经元随机分成癫痫组和对照组，癫痫组中的神经元培养至第10天时，经无镁人工脑脊液（artificialcerebrospinalfluid，ACSF）处理3h建立癫痫样放电模型，对照组中的神经元培养至第10天时，使用正常人工脑脊液处理3h。使用Westernblot检测p-CREB和β-actin的表达，免疫荧光双重标记磷酸化CREB（p-CREB）和神经元核抗原（neuronalnuclei，NeuN）的表达。结果：Westernblot显示p-CREB水平在癫痫样放电后2h即较对照组增强且在6h达到高峰，在12h和24h都维持在增强水平，差异皆有统计学意义（P＜0.01）。取癫痫样放电后6h的神经元行免疫荧光检测，其荧光强度绝对值较对照组明显增强，差异有统计学意义（P＜0.01）。结论：p-CREB水平在海马神经元无镁致痫性损伤后增强，可能在癫痫样放电中起到重要作用。