肝癌干细胞的培养、鉴定及CIK对其生长、增殖的影响

目的：探讨细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokineinducedkiller，CIK）对肝癌干细胞（livercancerstemcells，LCSCs）生长、增殖的影响。方法：用含多种细胞因子（LIF、EGF、bFGF及B27）的无血清培养液（serum-freemedium，SFM）诱导SMMC7721人肝癌细胞产生LCSCs，并行LCSCs表面标志CD133、CD90的流式仪（flowcytometry，FCM）检测鉴定与裸鼠致瘤能力观测。以IFN-γ、CD3单克隆抗体（humanCD3monoclonalantibody，hCD3mAb）与IL-2等诱导肝癌患者外周血单个核细胞（peripheralbloodmononuclearcells，PBMCs）的悬浮细胞生成CIK。用Transwell培养小室将LCSCs与不同密度的CIK在同一培养体系内以该小室膜分隔培养24、48、72h，采用CCK-8试剂盒检测CIK对LCSCs生长、增殖的影响。以RT-PCR与Westernblot分别检测与CIK共培养的LCSCs的增殖细胞核抗原（proliferatingcellunclearantigen，PCNA）基因及其编码蛋白的表达变化。结果：FCM检测显示，LCSCs高表达干细胞表面标志分子CD133、CD90。CCK-8法检测表明，与对照比较，与相同密度的CIK共培养的LCSCs，其生长、增殖减慢，48h开始变得更加明显（P<0.01）。RT-PCR、Westernblot检测显示，CIK能明显下调LCSCs的PCNA基因及其编码蛋白的表达。结论：成功诱导培养并鉴定到LCSCs。肝癌患者的CIK可明显抑制LCSCs的生长、增殖与下调其PCNA基因及其编码蛋白的表达。