甲状腺髓样癌人源噬菌体单链抗体的筛选及初步鉴定

目的：从大容量甲状腺髓样癌（medullarythyroidcarcinoma，MTC）人源噬菌体单链抗体（singlechainvariablefragments，scFv）库中筛选出特异的抗MTC单链抗体，并对其生物学特性进行鉴定。方法：分别以甲状腺上皮细胞TEC细胞株和MTC细胞TT细胞株为抗原进行5轮“吸附-洗脱-扩增”的富集循环，筛选出抗MTC抗体，将筛选出的阳性克隆感染E.coliHB2151；异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside，IPTG）诱导抗体可溶性表达，HiTrapTMAntiE-tag柱纯化表达抗体；SDS-PAGE和Westernblot检测抗体表达和相对分子质量；ELISA检测可溶性scFv的特异性和免疫活性，分为TT细胞组、SW480细胞组、TEC细胞组和PBS空白对照组，分别检测各组在酶标仪A450nm处的吸光度；四甲基偶氮唑盐比色分析法（methylthiazolyltetrazolium，MTT）分别检测TT细胞组、SW480细胞组与不同浓度svFv反应并读取A490nm处的吸光度，设置空白对照PBS组，分别计算细胞抑制率。结果：5轮筛选后，抗体得到了明显富集。随机挑取单个细菌克隆，phageELISA和scFvELISA阳性率分别为65%和50%。SDS-PAGE、Westernblot结果显示MTC特异性抗体分子量为28kD左右。ELISA结果显示，TT细胞组的吸光度（0.41±0.12）较SW480细胞组（0.20±0.03）、TEC细胞组（0.13±0.01）、PBS空白对照组（0.07±0.01）明显增加（P=0.000）。MTT法结果显示，TT细胞组和SW480细胞组在scFv浓度为0.1、1、10μmol/L时，2细胞株间抑制率有统计学意义，统计量分别是t=2.881，P=0.02；t=5.073，P=0.006；t=7.324，P=0.000，且在scFv浓度为10μmol/L时，对TT细胞的抑制率最高（0.59±0.15）％。结论：利用噬菌体抗体库技术成功获得了特异性的抗MTC人源单链抗体。