人ZnT-8作为1型糖尿病新型免疫调节剂的研究

目的：构建人锌转运体8（Zinctransporter8，ZnT-8）羧基端原核表达载体，表达和纯化人ZnT-8羧基端（ZnT-8-COOH）重组蛋白，为寻找1型糖尿病新型免疫调节剂创造条件。方法：人ZnT-8-COOHcDNA克隆入pET-32a载体，在大肠杆菌BL21中利用异丙基-硫代-β-D-半乳糖苷（isopropyl-thio-β-D-galactoside，IPTG）诱导表达，经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Westernblot鉴定表达产物，镍离子亲和层析纯化重组蛋白。40只4周龄的雌性非肥胖型糖尿病（nonobesediabetic，NOD）小鼠随机分为ZnT-8重组蛋白预处理组及生理盐水对照组，分别腹腔注射ZnT-8重组蛋白和生理盐水，每周测量各组NOD小鼠体质量，检测血糖、血清C肽水平。结果：经PCR扩增后得到306bp的DNA片段，成功构建到pET-32a表达载体上，经测序分析序列正确；ZnT-8重组蛋白在大肠杆BL21中获得成功表达，并得以有效纯化。ZnT-8重组蛋白预处理组NOD小鼠与生理盐水对照组相比，28周龄时ZnT-8重组蛋白预处理组的体质量高于生理盐水对照组（P<0.05）。28周龄时ZnT-8重组蛋白预处理组的血糖低于生理盐水对照组（P<0.05）；28周龄时ZnT-8重组蛋白预处理组的血清C肽水平高于生理盐水对照组（P<0.05）。结论：成功制备人ZnT-8-COOH重组蛋白，并初步证实了其对1型糖尿病的免疫调节作用。