p38MAPK在钛颗粒诱导的破骨细胞形成中的作用

目的：探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（p38mitogen-activatedproteinkinase，p38MAPK）在钛颗粒诱导的破骨细胞形成中的作用。方法：提取小鼠骨髓细胞，接种于24孔板后分为3组：①空白对照组；②核因子κB受体活化因子配体（receptorac－tivatorfornuclearfactor-κBligand，RANKL）组：每孔加入50ng/mlRANKL；③钛颗粒+RANKL组：每孔加入0.01%钛颗粒悬液（0.1mg/ml）及RANKL50ng/ml，抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistantacidphosphatase，TRAP）染色鉴定和计数破骨细胞。Westernblot检测p38、磷酸化p38的表达水平，通过腺病毒介导的p38siRNA沉默p38的表达后，观察破骨细胞数目及相关蛋白RANK的变化情况。结果：各组破骨细胞计数结果分别为：空白对照组2.0±0.8，RANKL组62.8±5.6，钛颗粒+RANKL组93.0±8.8（F=235.193，P=0.000）。RANKL组高于空白对照组（P=0.000），钛颗粒+RANKL组明显高于RANKL组（P=0.000）。Westernblot结果显示钛颗粒能明显提高p38的磷酸化水平（p-p38/p38相对值：空白对照组0.29±0.05，RANKL组0.64±0.05，钛颗粒+RANKL组0.87±0.05，F=106.491，P=0.000，钛颗粒+RANKL组高于空白对照组和RANKL组P1=0.000，P2=0.001）。转染腺病毒介导的p38siRNA后，Ad-sip38干扰组RANK蛋白的表达水平低于对照组和Ad-RFP组，破骨细胞数目也明显低于对照组和Ad-RFP组（破骨细胞计数：对照组99.8±13.5，Ad-RFP组95.8±7.1，Ad-sip38组3.8±2.5，F=148.654，P=0.000，对照组与Ad-RFP组无明显差异P=0.541，Ad-sip38处理组与对照组和空白病毒组比较均P=0.000）。结论：p38MAPK在钛颗粒诱导的破骨细胞形成中起重要的作用。