金黄色葡萄球菌重组表皮剥脱毒素A的原核表达

目的：通过基因工程技术获取重组表皮剥脱毒素A（recombineexfoliativetoxinA，rETA），为深入研究表皮剥脱毒素的致病机制提供实验材料。方法：根据GenBank公布的ETA基因序列设计引物，从金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus，S.aureus）基因组中扩增ETA基因，插入原核表达载体pQE30，构建重组质粒pQE30-ETA。将pQE30-ETA转化表达菌E.coliM15，优化诱导表达条件，SDS-PAGE分析重组蛋白的表达，Westernblot鉴定。重组蛋白经Ni2+-NTA树脂纯化后，注入BALB/C小鼠皮下，观察皮肤病理改变，鉴定重组蛋白的生物学活性。结果：重组质粒pQE30-ETA序列分析显示插入的基因片段全长927bp，与基因文库中的ETA序列完全吻合。SDS-PAGE分析显示表达产物相对分子量约为27kD，在IPTG终浓度0.1mmol/L，诱导时间4h，可得到最大表达量的可溶性蛋白，约为20%。Westernblot显示与S.aureus产生的ETA蛋白在同一位置，重组蛋白经Ni2+-NTA树脂纯化后蛋白纯度达90%以上，注射重组蛋白的小鼠表皮内出现水疱和裂隙。结论：成功构建了重组质粒pQE30-ETA，表达了具有生物学活性的重组S.aureus表皮剥脱毒素A。