猪带绦虫TSO45W-4B基因在长双歧杆菌中的表达

目的：在成功构建猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒pGEX-TSO45W-4B的基础上，研究猪带绦虫TSO45W-4B基因在长双歧杆菌中的表达情况。方法：将猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒pGEX-TSO45W-4B电转化入长双歧杆菌，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl-β-d-thiogalactoside，IPTG）诱导表达，十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodiumdodecylsulfatepolyacrylamidegelelectrophoresis，SDS-PAGE）和Westernblot分析表达情况。结果：酶切、聚合酶链反应（poly－merasechainreaction，PCR）和测序证实，重组质粒pGEX-TSO45W-4B成功转入长双歧杆菌。SDS-PAGE显示，重组蛋白相对分子质量（Mr）约为40kD，经谷胱甘肽转移酶（glutathioneS-transferase，GST）亲和层析后可获得纯度为85%以上的重组蛋白。Westernblot显示，重组蛋白能被兔抗TSO45W-4B血清、囊虫病猪血清和囊虫病患者血清所识别。结论：猪带绦虫TSO45W-4B基因能够在长双歧杆菌中获得表达，表达的重组蛋白具有特异的抗原性。