亚洲玉米螟幼虫血淋巴中酚氧化酶原的多克隆抗体制备及免疫学特性分析

为探讨酚氧化酶原(PPO)的合成转运机制,采用硫酸铵沉淀、BlueSepharoseCL-6B亲和层析和PhenylSepharoseCL-4B疏水层析等方法从亚洲玉米螟幼虫血淋巴中纯化得到PPO,纯化倍数为369.85,回收率为35.34%。采用免疫印迹和酶联免疫吸附进行纯化PPO的免疫原性及其多克隆抗体的效价测定,并以透射电镜检测PPO在亚洲玉米螟幼虫体壁和中肠中的分布。结果表明,纯化PPO蛋白全酶相对分子量约为158？kD;免疫2只鼠后所得pAb间接ELISA效价均高达10-5,其中第2号小鼠pAb效价最高为1？∶4.08×104;PPO多克隆抗体具有相对较高的特异性;在亚洲玉米螟5龄幼虫中肠和体壁组织中金颗粒呈团状和点状分布。