烟草蚀纹病毒外壳蛋白基因的克隆、原核表达及抗血清的制备

从山东省感病的烟草上分离获得了一烟草蚀纹病毒(TEV)分离物,命名为TEV-SD1。根据已报道烟草蚀纹病毒外壳蛋白(coatproteinCP)基因序列设计并合成2条引物,通过RT-PCR扩增得到长度约800bp的目的片段。将目的片段与质粒pET-22b(+)连接,构建了包含TEVCP基因的原核表达载体pETEV-CP,并导入大肠杆菌BL21中。序列分析表明:TEV-SD1的CP基因全长789bp,编码263个氨基酸;与GenBank中已报道的TEV5个分离物CP基因相比,核苷酸及推导的氨基酸序列同源性为94.1%~98.6%。37℃培养条件下,BL21/pETEV-CP经IPTG诱导表达,SDS-PAGE结果显示,表达的TEVCP融合蛋白的相对分子质量约为33kDa。以表达的融合蛋白为抗原,免疫家兔,制备的抗血清的效价为1/2048,且具有良好的特异性。