菜豆种子中菜豆普通花叶病毒的RT-PCR检测

为研究国家作物种质库中保存菜豆种质携带种传菜豆普通花叶病毒(BCMV)的状况,根据BCMV的cp基因序列设计一对特异性引物,从BCMV侵染的菜豆叶片上扩增出与理论大小一致的714？bp的片段。在此基础上,应用改进CTAB法从菜豆干种子中提取总RNA并特异性扩增出相同大小的片段。对目的片段进行克隆、测序和序列同源性比较,结果表明,扩增片段的序列与其它BCMV的cp基因序列同源性达88%~98%,确证该方法可以从菜豆干种子中直接检测BCMV。利用建立的方法,分别从单粒菜豆种子样本和30粒菜豆种子样本中检测到BCMV,其检测灵敏度较ELISA方法更高。来自河北的紫芸豆单粒种子带毒率高达100%,而在不同地理来源的6份菜豆种质中,4份被检出携带BCMV,表明入库保存的菜豆种质和种子已普遍为BCMV所侵染。