花鼠乳酸脱氢酶C基因cDNA的克隆、分析及原核表达

为研究花鼠乳酸脱氢酶C(lactatedehydrogenaseC,LDH-C)对花鼠免疫不育控制的影响,以花鼠睾丸cDNA为模板,通过RT-PCR技术得到花鼠LDH-C基因cDNA编码区,并进行序列分析,构建花鼠LDH-C的原核表达载体,导入到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹法对表达产物进行鉴定.结果显示:扩增出的cDNA片段为999bp,编码332个氨基酸,含有完整的开放阅读框;负电荷残基与正电荷残基均为36个;预测蛋白质分子量为37kD,理论等电点为7.04,无信号肽和跨膜区,推测其是一种非分泌、疏水性蛋白.α螺旋、无规则卷曲以及延伸链是sLDH-C蛋白二级结构的主要成分.重组菌在IPTG诱导下获得了约37kD带有His-Tag的目的蛋白.