鞭毛素蛋白FliCaaa诱导水稻免疫反应的活性测定

为阐明燕麦嗜酸菌(Acidovoraxavenaesubsp.avenae,Aaa)鞭毛素蛋白FliCaaa及其结构域对水稻免疫反应的诱导作用,通过分子生物学和生物信息学方法,对Aaa菌株IPN1的鞭毛素进行基因克隆及其序列分析;在大肠杆菌中对该基因全长、N端和C端片段进行了原核表达,纯化了FliCaaa蛋白及其截短肽段;采用水稻叶片浸润法测定了表达蛋白对水稻免疫反应的诱导活性。结果表明,通过特异性引物的PCR扩增,获得1479bp的鞭毛素基因fliCaaa,其编码产物含有492个氨基酸,分子量为49.4kD,具有flagellin-N和-C两个保守结构域;原核诱导表达获得了FliCaaa、FliCaaa-N和FliCaaa-C可溶性融合蛋白;3种纯化蛋白均能诱导水稻细胞死亡和H2O2产生等免疫反应,但诱导能力略有差异。