茵陈醇提物抗游离脂肪酸脂对体外培养HepG2细胞的毒性作用及机制研究

目的：研究中药茵陈醇提物对游离脂肪酸刺激HepG2细胞所致肝脂毒性的抑制作用及机制。方法：制备大鼠的正常血清和药物血清，在经毒性试验确定无药物毒性浓度的前提下，分设正常组、模型组和茵陈醇提物组(10%，1%，0.1%3个剂量)，以相应浓度的正常血清和药物血清培养HepG2细胞，同时添加长链游离脂肪酸(FFA)刺激HepG2细胞24h。观察：①细胞上清肿瘤坏死因子(TNF-α)含量(ELISA法)；②细胞内甘油三酯(TG)含量、细胞脂肪油红O染色；③细胞内磷酸化κB抑制蛋白(P-IκB)、组织蛋白酶B(ctsb)、凋亡抑制基因相关X蛋白(Bax)蛋白表达(WesternBlotting法)；④细胞TNF-α，ctsb和Bax基因表达(real-timePCR)；⑤细胞内ctsb的表达和分布(免疫荧光法)。结果：模型组细胞内TG及上清TNF-α含量显著升高，分别达(590±186)mg·g-1、(77±11)pg·mgprot-1，细胞内ctsb、P-IκB的蛋白表达以及ctsb、TNF-α的mRNA表达显著增强；而10%茵陈醇提物组细胞内TG和上清TNF-α含量较模型组显著降低，仅为(335±54)mg·g-1、(55±7)pg·mgprot-1，且显著抑制细胞内ctsb、P-IκB的蛋白表达以及ctsb、TNF-α的mRNA表达。结论：茵陈醇提物对FFA诱导的HepG2细胞脂肪变性、TNF-α分泌有显著的抑制作用，其作用与抑制ctsb等基因和蛋白表达有关。