PMI基因作为选择标记的植物表达载体构建及转化白花丹参体系的建立

目的：构建含有大肠杆菌6-磷酸甘露糖异构酶（6-phosphomannoseisomerase，PMI）基因并替换潮霉素抗性（hygromycin，hyg）基因的植物表达载体pCAMBIA1305-PMI，同时建立以PMI/甘露糖为筛选标记的白花丹参转基因体系。方法：首先从大肠杆菌EscherichiacoliDH5α中克隆PMI基因，然后以PMI基因替换植物表达载体pCAMBIA1305中的hyg基因，构建了以PMI基因为选择标记基因的植物表达载体pCAMBIA1305-PMI，并用电击转化方法导入根癌农杆菌AgrobacteriumtumefaciensLBA4404中，用叶片浸染法转化白花丹参。结果：在白花丹参MS+6-BA1.5mg·L-1+NAA0.1mg·L-1固体分化培养基中附加20g·L-1甘露糖和10g·L-1蔗糖为碳源的选择压力下，pCAMBIA1305-PMI的转化率为23.7%，对再生植株用PCR检测证实了PMI基因的导入。结论：建立了以PMI-甘露糖为选择系统的白花丹参转基因体系，可应用于后续目的基因的转化奠定了基础。