基于熔解曲线分析技术的木通类药材的分子鉴别

高分辨率熔解曲线(highresolutionmelting,HRM)是一种主要用于基因分型和突变扫描的分子诊断技术,在中药真伪鉴定中有着广泛应用前景。该文将高分辨率熔解曲线技术应用于木通药材的鉴别,即选择trnH-psbA通用引物,在退火温度为58℃,35个循环数的条件下,建立正品木通药材的熔解曲线模型,并筛选确定其DNA模板浓度、引物浓度、Mg离子浓度的适宜范围。结果表明,在DNA质量浓度为5~125mg·L-1、引物浓度0.4μmol·L-1、Mg离子浓度2.0mmol·L-1的条件下,木通药材的熔解曲线为双峰,其Tm为(81.84±0.16),(85.28±0.16)℃;川木通熔解曲线为单峰,其Tm为(83.22±0.19)℃;关木通熔解曲线为双峰,其Tm为(81.67±0.14),(84.24±0.10)℃。该方法可以实现简单、快速、高通量、可视化的的木通类药材的鉴定。