刺五加P450基因原核表达体系的建立与表达条件的优化

根据已克隆得到的刺五加P450基因的cDNA序列设计引物,构建刺五加P450基因的原核表达载体pET30a-P450,并对重组菌株BL21/pET30a-P450的原核表达条件进行了筛选优化。实验结果显示,pET30a-P450转化大肠杆菌BL21后可实现P450基因的原核表达,SDS-PAGE分析显示其在53kDa处有显著诱导条带;表达体系的最佳诱导温度为27~37℃,最佳IPTG浓度为1mmol·L-1,最佳培养基为LB液体培养基,最佳诱导时间为24h。因此,刺五加P450基因能够通过表达载体BL21/pET30a-P450实现该基因的原核表达,该体系的诱导温度、IPTG浓度、培养基种类以及诱导时间均可影响目的蛋白的表达量,但影响强度不同。