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ISSN: 2333-9721
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基于熔解曲线分析技术的鹿茸药材分子鉴别

Keywords: 高分辨熔解曲线,鹿茸药材,分子鉴定

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高分辨率熔解曲线(highresolutionmelting,HRM)是一种主要用于基因分型和突变扫描的分子诊断技术,在中药真伪鉴定中有着广泛应用前景.文章将高分辨率熔解曲线技术应用于鹿茸真伪鉴别,利用COⅠ序列,在退火温度为60℃,45个循环数的条件下,建立正品鹿茸药材熔解曲线模型,并筛选确定其DNA模板浓度、引物浓度、Mg2+浓度的适宜范围.结果表明,鹿茸药材在模板DNA质量浓度为10~100mg·L-1、引物浓度0.2μmol·L-1,Mg2+浓度2.0mmol·L-1的条件下,梅花鹿熔解曲线为双峰,其Tm分别为(81.96±0.07),(84.51±0.03)℃;马鹿熔解曲线为双峰,其Tm为(82.58±0.13),(85.95±0.05)℃.该方法可以实现简单、快速、高通量、可视化的鹿茸药材真伪鉴定.

References

[1]  傅雷, 孙艺平, 赵心宇,等. 鹿茸的化学成分以及药理作用研究进展[J]. 时珍国医国药, 2007(4):805.
[2]  赵磊,李继海,朱大洲,等. 5种鹿茸营养成分的主成分分析[J]. 光谱学与光谱分析,2010,30(9):2571.
[3]  刘向东,张阳. 鹿茸品种鉴定与质量评价的研究近况[J]. 辽宁中医药大学学报,2008,10(7):126.
[4]  王树春, 龚宁波, 陈海明,等. 中药材鹿茸(花鹿茸)的X衍射Fourier谱分析[J]. 中草药,2001,32(12):1123.
[5]  张丽,王树春,吴云山,等. 马鹿茸的X射线衍射Fourier指纹图谱鉴定[J]. 中成药,2005,27(5):577.
[6]  陈士林,郭宝林,张贵君,等. 中药鉴定学新技术新方法研究进展[J]. 中国中药杂志,2012,37(8):1043.
[7]  王义权, 周开亚. 中药材分子标记鉴别的现状及其应用[J]. 药学进展, 1999(4):193.
[8]  张蓉,刘春生,黄璐琦,等. 鹿茸饮片的DNA条形码鉴别研究[J]. 中国药学杂志,2011,46(4):263.
[9]  王学勇,刘春生,张蓉,等. 位点特异性PCR方法的建立及对近源种鹿茸药材的鉴别研究[J]. 中国中药杂志,2009,34(23):3013.
[10]  Guttmann T, Vitek A, Pivec L. High resolution thermal denaturation of mammalian DNAs[J]. Nucl Acids Res, 1977, 4(2): 285.
[11]  Ririe K M,Rasmussen R P, Wittwer C T. Product differentiation by analysis of DNA melting curves during the polymerase chain reaction[J]. Anal Biochem, 1997, 245(2): 154.
[12]  Vossen R H, Aten E, Roos A, et al. High-resolution melting analysis (HRMA)—more than just sequence variant screening[J]. Hum Mutat, 2009, 30(6): 860.
[13]  Wittwer Carl T. High-resolution DNA melting analysis: advancements and limitations[J]. Hum Mutat, 2009, 30(6):857.
[14]  李茹,廖灿,李东至,等. 高分辨熔解曲线分析技术检测中国人常见β地中海贫血基因突变[J]. 中国优生与遗传杂志,2011,19(7):19.
[15]  Madesis P, Ganopoulos I, Anagnostis A, et al. The application of Bar-HRM (barcode DNA-high resolution melting) analysis for authenticity testing and quantitative detection of bean crops (Leguminosae) without prior DNA purification[J]. Food Control, 2012, 25(2): 576.
[16]  朱岩芳, 张炜, 胡晋,等. 高分辨率熔解曲线分析(HRM)及其在植物种质资源鉴定中的应用[J]. 种子, 2013(10):57.
[17]  蒋超, 黄璐琦, 袁媛,等. 酶切-熔解曲线分析:一种新的SNP分型方法及其在中药材鉴定中的应用[J]. 药学学报, 2014,49(4): 558.
[18]  尤崇革, 李晓军, 郜莉娜,等. 高分辨熔解技术常用荧光染料的SNP基因分型能力比较[J]. 临床检验杂志, 2011,29(8):575.
[19]  郭心灵, 尤崇革. 高分辨率熔解曲线技术常用的仪器和荧光染料[J]. 分子诊断与治疗杂志, 2012,4(1):1674.
[20]  Varga A, James D. Detection and differentiation of Plum pox virus using real-time multiplex PCR with SYBR Green and melting curve analysis: a rapid method for strain typing[J]. J Virol Meth, 2005, 123(2): 213.
[21]  Barbara Druml, Margit Cichna-Markl. High resolution melting (HRM) analysis of DNA-Its role and potential in food analysis[J]. Food Chem, 2014,158: 245.
[22]  童宇茹,蒋超,黄璐琦,等.基于DNA熔解曲线分析技术的三七粉分子鉴定[J].药物分析杂志,2014,34(8):1384.
[23]  Victor H Peňa, Geysson J Fernández,Andrés M Gómez-Palacio,et al. High-resolution melting (HRM) of the cytochrome B gene: a powerful approach to identify blood-meal sources in Chagas disease vectors[J]. PLoS Neglect Trop D, 2012(2):1530.
[24]  Jaakola L, Suokas M, H?ggman H. Novel approaches based on DNA barcoding and high-resolution melting of amplicons for authenticity analyses of berry species[J]. Food Chem, 2010, 123(2): 494.

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