应用IC-RT-PCR法检测怀地黄中烟草花叶病毒(TMV)

目的:建立一套快速、灵敏、高效的怀地黄TMV检测技术,为怀地黄TMV的脱毒检测提供技术支持,以实现怀地黄脱毒苗的产业化生产,改善病毒病引起的品种退化现象。方法:根据GenBank上登录的TMV外壳蛋白基因保守序列,设计特异性引物,利用免疫捕捉RT-PCR(IC-RT-PCR)技术检测怀地黄中的TMV,并对PCR扩增产物进行测序。结果:利用IC-RT-PCR技术扩增出了预期目的条带,其扩增产物与地黄TMVCP基因(登录号为AY555269)核苷酸序列的同源性达95.29%,氨基酸同源性达96.7%。结论:建立了怀地黄TMV的IC-RT-PCR检测技术,集免疫学与分子生物学检测技术于一体,灵敏度高,操作简便,适合于怀地黄TMV的快速检测。