应用快速分离色谱-串联质谱(RRLC-QQQ)定量分析脑缺血后脑组织中内源性氨基酸的含量

目的:基于RRLC-QQQ建立脑缺血后脑组织中未衍生化的内源性氨基酸的含量测定方法。方法:采用DiamonsilC18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,15min内同时测定12种氨基酸。乙腈-0.1%甲酸水梯度洗脱,流速为0.5mL·min-1。离子源为ESI,正离子扫描模式,扫描方式为多反应检测。结果:各氨基酸标准曲线在检测范围内均呈良好线性(r>0.996),其检测限低于1.53μg·L-1,定量限低于3.09μg·L-1,高中低3个浓度水平日内和日间精密度的RSD均小于11%。结论:实际样品测定结果表明与假手术组相比,在脑缺血病理状态下,除N-乙酰天门冬氨酸外,脑组织中其余氨基酸水平均升高。部分氨基酸有显著变化,变化水平在术后12,24h呈时间依赖性。该方法简便,快速,灵敏。这种方法可以应用于寻找脑缺血生物代谢标记物,探索研究脑缺血分子机制以及中药多成分组合药物协同作用机制。