毛白杨两个Phi类GST基因的克隆及生化特性

？谷胱甘肽转移酶(glutathioneS-transferase,GST)在植物的抗逆反应、细胞信号转导和抗病等方面发挥着重要作用。从毛白杨(Populustomentosa)中克隆到2个Phi类GST基因(PtoGSTF1和PtoGSTF2),它们分别编码215和218个氨基酸残基的蛋白质。DNA序列分析显示这2个基因均含有2个内含子。组织表达模式分析表明,这2个基因在毛白杨的根、茎、叶、韧皮部和顶芽组织中均表达,是组成型表达基因。在大肠杆菌中表达这2个基因并纯化重组蛋白。酶活性分析显示PtoGSTF1和PtoGSTF2蛋白对底物CDNB、NBD-Cl、NBC和Cum-OOH都具有酶学活性,但活性差异较大。动力学分析显示,PtoGSTF2对NBD-Cl的亲和力是PtoGSTF1的2.5倍,但PtoGSTF1的催化效率是PtoGSTF2的56.8倍。热力学稳定性分析显示,PtoGSTF1比PtoGSTF2具有更高的热力学稳定性。因此,酶学性质的差异预示着这2个Phi类GST基因可能存在功能上的分化。