小麦TaMAPK2激酶基因的原核表达以及多克隆抗体制备

MAPK蛋白激酶是一类重要的植物胁迫信号调控因子。为了研究小麦MAPK基因的功能，本实验克隆了小麦MAPK蛋白激酶基因TaMAPK2。为了制备TaMAPK2基因的多克隆抗体，TaMAPK2的非保守区段的DNA序列anti-MAPK2被构建到原核表达载体pET-28a-(+)上，表达融合蛋白His-antiMAPK2。在终浓度为1mmol/LIPTG诱导1h的条件下，融合蛋白His-antiMAPK2表达量达到最大。通过蛋白标记亲和层析柱（HisTrapTMHP）得到纯化的His-antiMAPK2融合蛋白。利用新西兰大白兔制备了TaMAPK2基因的多克隆抗体，ELISA竞争抑制法检测抗体效价检测，效价为1：80000，能满足后续试验要求的效价值，为进一步分析TaMAPK2的蛋白定位、表达等提供基础。