紫云英ISSR引物的筛选及PCR反应体系的优化

以紫云英为研究材料，用哥伦比亚大学（UBC）公布的100条ISSR引物和十一种紫云英品种的DNA为模板进行PCR扩增，筛选出33条扩增条带较好的ISSR引物，对其中的ISSR引物进行梯度PCR筛选出最佳的退火温度。再采用正交实验和单因素实验相结合的方法对紫云英ISSR-PCR反应体系的五种因素（模板，Mg2,TaqDNA聚合酶，dNTP及引物）进行优化浓度。确立了适合紫云英的ISSR分析的反应体系。在25μL反应体系中，反应体系的量为：DNA模板50.00ng，Mg22.00mmol/L,Taq聚合酶1.0U,dNTP0.25mmol/L;引物0.20μmol/L,2.5μL10？uffer。本实验为以后利用ISSR技术进行紫云英遗传多样性分析和物种保护奠定了技术基础；为开发紫云英SSR引物提供了条件。