大豆胚尖遗传转化体系优化及抗逆基因GmPK转化研究

采用GUS基因瞬时表达检测方法，通过正交试验以AS浓度、侵染菌液OD值、侵染时间、共培养时间和恢复培养时间5个因素在4个水平上进行分析，优化了农杆菌介导的大豆胚尖遗传转化体系，并在此基础上进行了抗逆基因GmPK的遗传转化。结果表明，采用共培养培养基中添加100μmol/LAS、侵染菌液OD600值0.9、侵染15h、共培养5d和恢复培养3d的转化条件最佳，GUS阳性率达74.59%，经PCR及RT-PCR进一步验证获得了转基因阳性植株。利用优化的最佳条件进行抗逆基因GmPK的转化，炼苗移栽成活的再生植株经PCR及PCR-Southernblotting验证，初步证明外源基因已经整合至大豆基因组，转化率为0.6%。