苎麻纤维素合酶BnCesA1高变区蛋白的原核表达与条件优化

高等植物纤维素合酶是含有多个功能结构域的糖苷转移酶，催化合成β-1,4葡萄糖苷链，即高等植物细胞壁的重要成分之一纤维素。在同一物种例如在拟南芥中比对纤维素合酶家族各成员的序列信息，发现其蛋白序列中存在两个高变异区域（HVR），其中第一个HVR靠近NH2端（NHVR），富含酸性氨基酸。本研究克隆了苎麻纤维素合酶基因（BnCesA1）的NHVR编码序列，并以正确的阅读框亚克隆至含有6×His接头的pQE-N1原核表达载体，构建了pQE-N1-NHVR重组表达载体。在大肠杆菌BL21（DE3）中表达的重组蛋白His-tag-NHVR经Western-blotting验证后，正交优化得到该蛋白小量表达的最优条件组合为：所挑取的2号菌落在37℃下，IPTG的诱导浓度为0.1mmol/L，诱导表达4hr。本研究结果为纯化His-tag-NHVR融合蛋白，制备其抗体及进一步研究苎麻纤维素合酶局部功能或其组织特异性作用打下基础。