苦瓜果实β-半乳糖苷酶基因的克隆、表达及亚细胞定位

根据已构建苦瓜果实均一化文库中获得的1个与β-Gal基因相关的EST序列，采用经3’RACE技术，克隆获得1个苦瓜β-Gal基因的cDNA序列McGAL，全长为2261bp，开放阅读框2187bp，编码719个氨基酸。该基因在GenBank基因数据库的登录号为AFD54987.1。应用生物信息学软件对McGAL氨基酸序列分析表明，McGAL含有糖苷水解酶家族35的保守结构域G-G-P-[LIVM]-x-Q-x-E-N-E-[FY]，C端不含凝集素结构域。二级结构显示，该酶含有α-螺旋（19.89%），伸展链（26.98%），β-转角（6.54%）和无规卷曲（46.59%）。McGAL氨基酸序列与鹰嘴豆、苜蓿、绿豆、大豆、羽扇豆的氨基酸序列的同源性分别达到73%、73%、73%、72%和71%。亚细胞定位结果表明，McGAL定位在线粒体膜上。荧光定量结果表明，McGAL在果实绿熟期表达量最高并随之下降，该基因可能与果实成熟软化初期相关。