菰（Zizanialatifolia）ISSR反应体系的建立及优化

菰是一种稻族野生资源，水生或沼生，在我国有着广泛的分布。野生菰群体不仅是一种重要的育种基因资源，同时还有着巨大的生态作用。为建立适宜于菰的ISSR反应体系，以菰DNA基因组为模板对ISSR反应体系中的主要影响因子进行优化。采用单因素变量法在12个不同梯度水平上设计正交实验针对体系中dNTPs浓度、Mg2+浓度、Taq聚合酶浓度、引物浓度、模板DNA浓度及引物退火温度等6个因子进行优化，确定了在20μLISSR反应体系中各组分的最适因素水平分别为：3.0mMMg2+（10×Buffer），0.5mMdNTPs、1.0μM引物浓度、0.24U？μL-1Taq聚合酶、1.5ng？μL-1DNA模板以及55℃退火温度。应用该优化体系对80个菰材料进行扩增，证实了该体系的适用性和稳定性，为菰遗传资源的鉴定、评价与利用提供了技术支撑。