普通烟草八氢番茄红素脱氢酶基因的原核表达及表达谱分析

基于NCBI数据库中本氏烟(Nicotianabenthamiana)的烟草八氢番茄红素脱氢酶基因PDS(ABE99707)的核苷酸序列，设计并合成特异性引物，以烟草栽培品种红花大金元叶片总RNA为模板，通过PCR方法获得了烟草八氢番茄红素脱氢酶基因NtPDS的cDNA片段。序列分析表明，该基因编码区为1,749bp，编码582个氨基酸残基，推测该蛋白等电点为7.53，理论分子量为65.04kDa。通过构建融合表达载体pET-30a-NtPDS，并转化大肠杆菌BL21（DE3），在37℃下经1mmol/LIPTG诱导4h表达后，产生了以可溶性蛋白形式存在的NtPDS融合蛋白，并通过Westernblotting验证融合蛋白获得表达。利用半定量RT-PCR技术进行组织表达模式分析发现,该基因在烟草的叶片、花和茎中均有表达，在根中没有表达。该结果为进一步研究烟草八氢番茄红素脱氢酶NtPDS的酶活性和生物学功能奠定了基础。