一种高效可直接用于pcr分析的土壤总微生物dna抽提方法

以ctab-溶菌酶-蛋白酶k-冻融裂解法直接抽提土壤总微生物的基因组dna，利用g8000沉淀和纯化dna.结果表明，该方法是一种简便、有效可直接应用于pcr分析的土壤总微生物基因组dna的抽提方法.采用含聚乙烯吡咯烷酮(pvp)的缓冲液预洗，添加cacl2和bsa，可以去除腐殖酸；用peg8000沉淀dna，可以提高dna质量；采用冻融法破碎细胞，ctab、溶菌酶和蛋白质酶k共同作用以裂解细胞，可以保证获得大片段的dna，提高dna产率.用该方法抽提的七子花林下土壤总微生物dna产率为9.22μg·g-1，a260/a280为1.65，可适用于pcr扩增及扩增rdna限制酶切分析(ardra)技术，适宜的模板dna浓度为0.67ng·μl-1.快速、有效、可直接用于pcr分析的土壤总微生物dna提取方法的建立，为大规模的土壤微生物分子生态学研究提供了可能.