黄鳍鲷白细胞介素1β基因原核表达载体的构建

根据黄鳍鲷白细胞介素1β（interleukin-1β,il-1β）基因全长cdna序列（genbank登录号为ay669059）设计、合成1对特异性引物，扩增编码黄鳍鲷il-1β基因前体肽的基因序列，通过t-a克隆构建了克隆载体pmd18t-il1β。以克隆载体pmd18t-il1β为模板，以设计合成的带酶切位点的引物分别扩增黄鳍鲷il-1β的前体肽和预测的成熟肽基因序列，经bamhi和sali双酶切后将其插入表达载体pqe30中，构建了原核表达质粒pqe30-pil1β和pqe30-mil1β。经酶切、pcr鉴定并最终通过序列测定表明，基因已正确插入到载体的多克隆位点，序列和读码框都正确无误，为黄鳍鲷il-1β基因的体外重组表达研究打下了基础。