锦鲤疱疹病毒囊膜蛋白orf59的克隆、分析及主要b细胞表位区的原核表达

从感染锦鲤疱疹病毒（koiherpesvirus,khv）的锦鲤(cyprinuscarpiokoi)肾脏组织中提取dna，通过pcr扩增了khvorf59基因。该基因全长411bp，所编码的蛋白包含136个氨基酸，分子量14.3kda，等电点(pi)6.91，有12个潜在的o糖基化位点。此研究克隆的khvorf59基因第130位碱基由g突变为a，使其编码的第44位氨基酸由ala突变为thr。采用dnastar程序，在综合分析二级结构柔性区、蛋白的亲水性、表面可能性和抗原性指数的基础上，预测了khvorf59蛋白主要b细胞表位，并将其区段的编码序列与khvorf59完整编码序列分别克隆入原核表达载体pet-32a(+)，构建重组质粒pet32a-orf59s和pet32a-orf59c，转入大肠杆菌rosetta菌株，iptg诱导表达。sds-page及westernblot分析显示，pet32a-orf59s可以高效表达，表达的截短khvorf59蛋白主要以可溶性形式存在，采用hisbindresin填料，层析纯化了该截短蛋白。