砂梨果实acc氧化酶cdna克隆及其反义表达载体构建

利用rt-pcr和race技术从'早生新水'砂梨成熟果实cdna中克隆出acc氧化酶基因保守片段及其5'和3'端，拼接后获得砂梨果实acc氧化酶cdna全长。该cdna全长1225bp，将其命名为pyp-aco，genbank登录号为ef451060。pyp-aco核苷酸序列有一个945bp的开放读码框，5'端非翻译区为63bp，3'端非翻译区为217bp，与西洋梨和苹果的编码区核苷酸序列有较高的相似性，分别为98.3%和98.1%。pyp-aco推导编码314个氨基酸，该序列具备非血红素二价铁离子依赖型的氧化/加氧酶类的12个保守氨基酸和催化活性所需的3个氨基酸。将pyp-aco编码区序列反向插入pypx145载体，构建了由双35s启动子所控制的双元表达载体，同时已成功将表达载体导入根癌农杆菌菌株lba4404，为耐贮藏转基因梨选育奠定了基础。