黄瓜抗病基因类似序列(rga)的同源性分析和southern鉴定

使用clustalw和dnaman3.0分析了本实验室克隆的15个黄瓜抗病基因类似序列(rga)之间以及与烟草的n基因、亚麻的l6基因和拟南芥的rps2基因之间的同源性,并对这些rga进行了pcr和southern验证与分析。结果表明:15个黄瓜rga中,核苷酸序列同源性最高的是csrga2、csrga4和csrga5,其次是csrga6、csrga7、csrga8和csrga9,csrga1和csrga3也存在较高的同源性;其余的rga同源性较低。在氨基酸序列上也表现了相同的特征。与n、l6和rps2等抗病基因的产物之间同源性最高46%,最低22%。根据核苷酸序列设计了15对特异引物,用pcr方法验证了所有黄瓜rga的存在,其中csrga3在黄瓜品种间表现出多态性。利用特异引物pcr方法合成了15个黄瓜rga的地高辛探针,与ecorⅴ酶解的黄瓜‘215’、‘129’和‘l18’的基因组dna进行southern杂交,证实了各个rga在基因组上的存在,同时发现,csrga9、csrga11～csrga15都是多拷贝,csrga3是单拷贝,其余为双拷贝。