利用cdna-aflp技术研究苹果柱型与非柱型cdna的差异表达

以苹果(malus×domesticaborkh.)柱型品种舞姿、非柱型品种富士及其杂交f1群体中柱型、非柱型单株为研究试材,应用cdna-aflp(cdna-amplifiedfragmentlengthpolymorphism)技术,研究柱型与非柱型苹果cdna的差异表达,探讨了苹果柱型基因co表达的分子机制。通过64对引物组合的cdna-aflp分析获得了1630条在柱型与非柱型苹果中差异表达的片段。经过bsa(bulkedsegregantanalysis)分析和反向northern杂交鉴定,获得了11个差异表达的cdna片段,并进行了克隆、测序和序列同源性检索分析。有5个片段在genbank数据库中发现同源序列,其余的6个功能未知。核酸和氨基酸比对分析中同源性最高的是片段a7和a16。a7的核苷酸序列同源于红叶石楠photiniafraseri26s核糖体rna(97%)、蛋白同源于玉米的细胞色素p450单加氧酶(91%),a16的核苷酸(85%)及蛋白(93%)同源于直果草属triphysariaversicolor的α-expansin2基因。对a7、a16两个候选基因片段再进行正向northern杂交验证,在富士中表达最强,在非柱型后代、柱型后代及舞姿中表达依次减弱。由此推断,由细胞色素p450单加氧酶基因所调控的赤霉素gas变化影响了苹果柱型性状的表达。