甘蓝中硫氧还蛋白编码基因thl1的分子特性及表达研究

采用pcr和rt2pcr技术,以‘e1’甘蓝基因组dna和柱头cdna为模板对thl1基因进行扩增克隆,得到的片段长度分别为732bp和455bp。序列分析表明,克隆的dna和cdna序列与甘蓝‘西园四号’thl1的dna和cdna同源性分别为97.9%和98.3%,两条序列内含子的大小不同;同时,前者第2内含子不符合典型的gt2ag规则:即第2个内含子3′端碱基为at。将thl1基因cdna序列定向克隆到原核表达载体pet-43.1a(+),构建融合表达质粒pet43.1a(+)-thl1,在大肠杆菌bl21中表达出分子量为74kd的融合蛋白,经胰岛素检测,thl1有氧化还原活性,表明thl1在大肠杆菌中得到了正确表达。