利用内标为基础的rt-pcr技术检测葡萄茎痘伴随病毒

选取经rt-pcr检测确认带葡萄茎痘伴随病毒的‘全球红’葡萄品种。以葡萄叶片、韧皮部作为试材,采用sds法提取高质量总rna作为模板,以grspav的特异互补引物引导,反转录合成cdna,通过pcr扩增,获得830bp的预期目的片段。以线粒体nad5基因为内标,建立了grspav与nad5共扩增体系,将扩增的grspav特异性片段及nad5目的片段分别克隆测序,与ncbi中所提交的核酸序列进行比对,grspav与序列号af057136的同源性达96%;nad5与序列号d37958的同源性达96.67%。