柑橘黄龙病、裂皮病和衰退病病原的多重rt-pcr检测

建立了一种同时检测柑橘黄龙病病原类细菌(candidatusliberibacterasiaticus,hlb)、柑橘裂皮类病毒(citrusexocortisviroid,cevd)、柑橘衰退病病毒(citrustristezavirus,ctv)的多重rt-pcr技术体系。运用根据3种病原核苷酸保守区序列设计的特异性引物,成功的对同一样品中的hlb、cevd、ctv进行多重rt2pcr扩增,得到1160bp、371bp、273bp3条特异性大小与试验设计相符的条带。就影响多重pcr的主要因素引物浓度和退火温度进行了一系列优化,建立了能同时检测hlb、cevd、ctv的多重rt2pcr技术体系。该体系最低能从10pg总rna中检测出黄龙病类细菌和柑橘裂皮类病毒,从1pg总rna中检测到柑橘衰退病毒。对采自田间37份材料的实际检测表明:存在两种或3种病原的复合侵染。