羽衣甘蓝arc1与exo70a1蛋白相互作用结构域的分析与鉴定

为阐明羽衣甘蓝自交不亲和信号传递因子arc1与下游底物exo70a1相互作用的结构域，利用酵母双杂交系统进行检测与分析。将羽衣甘蓝boarc1、boarc1-n端（1~279aa，含有und结构域）及boarc1-c端（280~663aa，含有u-box结构域和armrepeat结构域）的序列分别构建到pgbkt7载体中，获得bd-arc1、bd-arc1-n和bd-arc1-c重组质粒。将羽衣甘蓝boexo70a1、boexo70a1-δ1（1~85aa）、exo70a1-δ2（1~270aa）及exo70a1-δ3（271~638aa，含有exo70结构域）的序列分别构建到pgadt7载体中，获得ad-exo70a1、ad-exo70a1-δ1、ad-exo70a1-δ2和ad-exo70a1-δ3重组质粒。将获得的重组质粒分别共转化到酵母y187菌株中，在双缺陷（-leu-trp）酵母培养基中培养与生长。β-gal显色检测结果表明，共转bd-arc1-n/boexo70a1-δ1或bd-arc1-n/boexo70a1-δ2的酵母在滤纸上显示蓝色，这说明boarc1的n端与boexo70a1的n端介导了两者的相互作用。